研究開発細胞構築受託サービス

CHO 細胞を用いた恒常発現細胞株の構築サービスを中心に、細胞株の培養条件や目的タンパク質の精製法に関する検討、さらには、研究用試薬としてのタンパク質製造まで皆様の研究の助けとなるような受託サービスを提供しております。特に、PoC（概念実証）の取得に向けたタンパク質提供にも対応しており、研究開発を初期段階からサポートいたします。

タンパク質の発現ベクターについて

当社では、北海道大学教授、鈴木定彦先生のご協力の下開発した、選択マーカー遺伝子として翻訳障害型のジヒドロ葉酸還元酵素（DHFR）遺伝子が組み込まれた 2 種類の高発現ベクター（図1）のいずれかに目的タンパク質の cDNA を導入し、CHO DG44 細胞を宿主として発現させます。
選択マーカー遺伝子が翻訳障害型であるため、ヒポキサンチン及びチミジン不含の培地中において細胞内のゲノム中にある高発現部位（転写ホットスポット）にベクターが組み込まれた細胞だけが効率よく生育してきます。
私たちの検討では、他社の発現系と比べ 7 倍以上の産生量を示し、高産生（図2）かつ継代安定的（表1、図3）な細胞株（セルプール）が得られています。
pDC 62 を使用した場合、pDC 6 使用時と比較して高発現量のセルプールが得られています（図4）。

実施結果例

図 1：ベクターマップ

※ pDC 62 は導入遺伝子の発現を安定化する目的で 3 箇所に UCOE 配列が追加されています。

図 2：初期細胞株（セルプール）での産生量の比較（扶桑発現系には pDC 6 使用）

同じターゲット（抗体分子）を A 社発現系と扶桑発現系の両方で発現させ、取得したセルプールの産生量を比較しました。A 社発現系で得られたセルプールを 1 としたときの扶桑発現系で得られたセルプールでの産生量の比率を示します。

表 1：取得したクローンの安定性（ pDC 6 を使用）

	遺伝子増幅前	遺伝子増幅後
①	79	40
②	50	32
③	63%	80%

恒常発現細胞の安定性について確認しました。
CHO DG44 細胞では遺伝子増幅によりコピー数を増やすシステムがあるため、遺伝子増幅したクローンも取得し、それぞれのクローンを 60 世代まで継代した際の安定性を比較検討しました。
①：60世代（60 G）まで継代したクローン数
②：①の細胞のうち、目的タンパク質の産生量が継代前の細胞（0 G）における産生量と比較して70% 以上の生産性を維持していたクローン数
③：継代安定性が得られた割合（②／①）

図 3：TOPクローンのフェッドバッチ培養における産生量の比率（pDC 6 を使用）

表 1 で私たちが得たクローンのうち、0 G における TOP クローン（最も産生量の高かったクローン）の 60 G における産生量は、0 G における産生量の 90% 以上を示しました。0 G において産生量の高かったクローンが継代を重ねても産生量を落とすことがないことを示しています。

図 4：pDC 6 又は pDC 62 を用いて同一遺伝子を導入した場合のタンパク質産生量の比較

それぞれのベクターを用いて得られたセルプール各 30 株について 3 日間の振とう培養におけるタンパク質の産生量を比較したとき、生細胞数はほぼ同じでしたが、pDC 62 を使用した方が発現量の多いセルプールを多く得ることができました。

扶桑薬品工業の受託サービスについて

細胞株の構築

セルプール、単一クローンの取得

当社は Cell Handler^TM（ヤマハ発動機）を導入しており、ベクターのトランスフェクションから 100 日以内での単一クローン取得が可能です。
お客様よりご提供いただいたアミノ酸配列から最適な cDNA 配列を合成（外部への再委託）し、当社で開発したベクターに導入します。導入後は図5 に示す通りセルプール又は単一クローンを取得します。

図 5：セルプール、単一クローン取得の概要

セルプール取得後に単一クローンとすることも可能です。
セルプール及びクローンいずれも目的タンパク質の発現及び発現量の確認を行います（SDS -PAGE、BLItz/Octet N1（IgG 又は一部のタグ付きタンパク質）、SEC）^※1。
セルプール及びクローンにつきましてはお客様のご希望に応じてストック（ Research Cell Bank（ RCB ））を作製します。

※1：SEC での濃度測定をご希望の場合は、標準品のご提供をお願いしております。また、測定法や抗体をご提供いただけるようであれば、ELISA や Western Blot での検出も実施いたします。

メトトレキサートを用いた遺伝子増幅（オプション）

恒常発現細胞株選別（セルプール作製）の段階でも高い産生量は期待できますが、更に高い産生量を希望される場合にお勧めしております。
単一クローンでも増幅をかけることは可能ですが、再度クローン化が必要となります。

継代安定性の確認

RCB につきましては継代安定性を確認することも可能です（ご希望の継代数次第で追加で必要となる作業日数が変わります）。
継代安定性の得られた RCB につきましてはお客様のご希望に応じて Parental Cell Bank（ PCB ）としてストックを作製します。

培養条件の検討

当社は Ambr® 15（Sartorius）とアドバンストコントロールバイオリアクターシステム BR1000（横河電機株式会社）を各 1 機所有しております。培養スケールに応じた培養条件の検討を実施いたします。
当社は ReadyTo Process WAVE^TM 25（Cytiva）も 1 機所有しております。動物試験など、早期の PoC 取得に不可欠な、研究用試薬としてのタンパク質を大量に必要とされる方にお勧めしております。
当社で作製した細胞の培養条件の検討だけでなく以下のような検討もお受けします。

お客様が所有するクローンの培養条件の検討
お客様が所有する新規の培養用添加剤や Feed を用いた培養検討

培養スケールに応じてフラスコから Wave 培養まで対応いたします。また上記 2 の検討には弊社が所有する細胞株をご使用いただくことも可能です。お気軽にご相談ください。

精製・分析について

タンパク質の精製は ÄKTA^TM avant 150（Cytiva）を用いて実施いたします。抗体（IgG）の場合は、ProteinA アフィニティクロマトグラフィーによる精製を実施いたします。ご要望に応じて各イオン交換クロマトグラフィーを組合わせた多段階での精製も実施いたします。
その他のタンパク質につきましても、各種クロマトグラフィーによる精製が可能です。
精製方法が確立されていないタンパク質につきましては、精製方法の検討（精製カラムのスクリーニング～精製工程の確立）も実施可能です。
精製したタンパク質は、SDS-PAGE 、SEC 等で分析し、純度の確認を行います。

実施施設

細胞株の構築及び培養はクリーンルーム内、必要に応じて同室内にあるクリーンベンチ内で実施いたします。
得られたタンパク質の精製、分析につきましては、一般の実験室内での実施となります。

納品物に関して

納品物例

試験計画書（ご依頼内容次第で、お客様と相談させていただきます）
培養上清又は精製物（研究用試薬としてご利用いただくことが可能です）
試験報告書（HPLC や電気泳動等にて実施したタンパク質の分析データを含む）
細胞株（要相談。当社所有の細胞株の場合、別途ライセンス費用が発生する可能性があります）

納品/価格

詳細は、下記のお問い合わせ先にお問い合わせください。

当社作製の細胞株や培養データが使用されました

学会名： IgA抗体医療学会学術集会（2025 年 6 月 25 日）
演題：医薬品製造に向けた二量体IgAの生産検討
演者：福島県立医科大学　高木基樹先生（筆頭演者）

学会名：日本動物細胞工学会（2025 年 12 月 8 ～ 11 日）
演題： High antibody-producing cell isolation process using Yamaha CELL HANDLER and its practical application
演者：扶桑薬品工業株式会社　辻岡一也（筆頭演者）

雑誌： Journal of Bioscience and Bioengineering 2025 Nov;140 (5) : 341-349.　
タイトル： Enhanced antibody production in Chinese hamster ovary cell cultures supplemented with barley shochu distillation by-product supernatant
著者： Nakamura A 他

本受託サービスについてのお問い合わせ

扶桑薬品工業株式会社　研究開発センター　創薬研究部バイオ医薬研究課

〒536-8523 大阪市城東区森之宮二丁目3番30号
E-mail : cellhandle@fuso-pharm.co.jp
Fax : 06-6964-2706

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